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cDNA文庫是指某生物某發(fā)育時(shí)期所轉(zhuǎn)錄的全部mRNA經(jīng)反轉(zhuǎn)錄形成的cDNA片段與某種載體連接而形成的克隆的集合。標(biāo)準(zhǔn)cDNA文庫構(gòu)建的基本原理是用 Oligo（dT）作逆轉(zhuǎn)錄引物，或者用隨機(jī)引物，給所合成的cDNA加上適當(dāng)?shù)倪B接接頭，連接到適當(dāng)?shù)妮d體中獲得文庫。

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文庫構(gòu)建流程：

1. 樣品QC

2. 從總RNA中分離mRNA（原始文庫將采用至少2 µg mRNA進(jìn)行構(gòu)建）

3. 以帶有NotI酶切位點(diǎn)的oligo（dT）Linker Primer為反轉(zhuǎn)錄引物，再在雙鏈cDNA的5’端加SalII adaptor

4. NotI酶切、過柱去除小片段

5. 將合成的雙鏈cDNA與載體進(jìn)行連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH10B感受態(tài)細(xì)胞

6. cDNA文庫的QC：檢測(cè)庫容量（重組子克隆數(shù)目）；隨機(jī)挑取30個(gè)克隆子進(jìn)行PCR鑒定和雙向測(cè)序分析，檢測(cè)含插入片段的克隆子比例，檢測(cè)平均插入片段大小

客戶提供

注明樣品的種屬，收集樣品后，應(yīng)將樣品立即置于干冰保持低溫運(yùn)輸。

我們提供

含有文庫的甘油菌和質(zhì)量分析鑒定報(bào)告

質(zhì)量保證

文庫含有至少4 x 10⁶個(gè)原始克隆

樣品平均插入片斷保證大于1.0 kb

有超過85%的載體含有插入片段

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cDNA文庫構(gòu)建

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